簡(jiǎn)單介紹下細胞爬片的使用步驟 細胞爬片步驟
(1)儲存液:1:10稀釋液可以保存在4℃里,三個(gè)月內仍然可以使用。稀釋、儲存和吸取多聚賴(lài)氨酸要使用塑料制品。
工作液:0.1%(w/v)PLL,用移液槍吸取0.3ml PLL+3ml無(wú)菌去離子水,混勻放于10ml無(wú)菌塑料離心管中。封口模密封后4℃存放。
(2)無(wú)菌處理:PLL不可以高溫消毒,故應過(guò)濾除菌分裝于無(wú)菌處理的細胞凍存管內,1ml/管,封口模密封,4℃保存。另外,準備無(wú)菌去離子水50ml。
細胞爬片方法與技巧
爬片的準備:
1、爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
2、應用蓋玻片,可根據自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;
3、將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜,第二天先用自來(lái)水沖洗20遍,再用三蒸水沖洗3遍(個(gè)人認為主要目的是沖洗干凈就可以了),放在飯盒或者培養皿(一定是玻璃的哦,要不然就„„)中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
培養板的準備:
1、泡酸過(guò)夜
2、沖洗,烘干(1、2步驟與前大致相同)
3、放入超凈工作臺用紫外線(xiàn)照1~2小時(shí)就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,若細胞貼壁能力不強,可經(jīng)多聚賴(lài)氨酸浸片后放入。貼壁能力強的話(huà),就可以省略了,進(jìn)行紫外線(xiàn)消毒)
注:此步自己的經(jīng)驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內,緊接著(zhù)放入培養板內。目的:
浸過(guò)PBS的爬片依靠表面的液體,可以用培養板孔底貼和緊密,以利于細胞長(cháng)到爬片上。(自己剛開(kāi)始做的時(shí)候,經(jīng)常就是細胞全都長(cháng)在了爬片與培養板之間,爬片上細胞罕見(jiàn)。)
細胞爬片:
1、胰酶消化細胞后計數
2、根據自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養板內即可
3、第二天即可進(jìn)行干預措施