細胞培養專(zhuān)題——6孔板接種和換液 ?。?)問(wèn):我的細胞傳代很正常,但一種到六孔板里(不管加藥和對照),總有兩三個(gè)孔(隨機)細胞長(cháng)得不好,很小,像破碎了。有人遇到過(guò)這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點(diǎn)
答:可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細胞剛剛拿出來(lái)?yè)Q液加液,培養基也是從4度冰箱拿出來(lái)不久,很容易細胞就會(huì )凍死了。建議你最好把培養基先在培養箱里邊孵育15min先。
另外,跟你細胞的生長(cháng)狀態(tài)也有關(guān)。加藥之前的細胞可以用高點(diǎn)的血清濃度培養。保證細胞狀態(tài)良好。
或者放在37度水浴鍋里孵育也可以,或者是培養板本身的問(wèn)題,你再換換其他培養板試試看。再有可能就是細胞狀態(tài)問(wèn)題了,種板時(shí)的血清濃度調高試一下
?。?)問(wèn):最近幾天,我用六孔培養板接種細胞,培養24小時(shí)后更換培養基,在更換培養基之前,顯微鏡觀(guān)察到細胞貼壁,狀態(tài)非常的好,更換了培養基后,立即用顯微鏡觀(guān)察,發(fā)現每個(gè)孔中都近乎有一半的細胞表現出近乎死亡的狀態(tài)。細胞變得非常小,產(chǎn)生大量的碎片,而另一半的細胞一切正常,異常細胞與正常細胞之間存在一條分水嶺,上半個(gè)圓是好的,下半個(gè)圓就不好,這是怎么一回事?
答:你可以看一下是不是培養板沒(méi)放水平。有一回我也出現過(guò)這種情況。你的培養液如何,如果培養液過(guò)期,細胞就不會(huì )貼壁。換一點(diǎn)新配制的培養液試一試。我也經(jīng)常碰到,我想可能是板的問(wèn)題,換一個(gè)牌子的板或換用培養瓶就沒(méi)問(wèn)題了。不知樓主所需換液的培養板多不多,換培養基的時(shí)候如果沒(méi)有注意風(fēng)機的影響,特別是所需換液的培養板很多時(shí),容易使細胞因風(fēng)吹失水而干縮破裂。如果如此,換液時(shí)應該逐個(gè)培養板進(jìn)行,別怕浪費吸管,注意操作的效率!