細胞培養知識（三）

如何選用特殊細胞系培養基？ 
 

培養某一類(lèi)型細胞沒(méi)有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(cháng)?？傊?，MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個(gè)好的開(kāi)始，各種目的無(wú)血清培養AIM V（12005）培養基（SFM）。

L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？ 
 L-谷氨酰胺在細胞培養時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有zui終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。

GlutaMAX-I是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩定？ 
GlutaMAX-I 二肽是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解。

什么培養基中可以省去加酚紅？
  酚紅在培養基中被用來(lái)作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應，培養細胞，尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí)，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養基。 酚紅在培養基中被用來(lái)作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應，培養細胞，尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí)，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養基。 如何用臺盼蘭計數活細胞？ 用無(wú)血清培養基把細胞懸液稀釋到200～2000個(gè)/毫升，在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數分鐘后，用血球計數板計數細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。

如何消除組織培養的污染？
  當重要的培養污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開(kāi)，用實(shí)驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過(guò)濾器。 高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實(shí)驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè )菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實(shí)驗步驟。 1. 在無(wú)抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。 2. 分散細胞懸液到多孔培養板中，或幾個(gè)小培養瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。 3. 每天觀(guān)測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。4. 確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2～3代。 5. 在無(wú)抗生素的培養基中培養細胞一代。 6. 重復步驟4。 7. 在無(wú)抗生素的培養基中培養4～6代，確定污染是否以已被消除。

培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？
  丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà)，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。